O método por difusão em agar, é uma forma simples e rápida de verificar a sensibilidade da estirpe bacteriana. Consiste na propriedade de difusão, segundo um gradiente de concentração do antibacteriano contido num papel de filtro, num agar nutritivo (substancia gelatinosa derivada de algas marinhas).
A bactéria colocada num disco com o antibacteriano, não crescerá numa área concêntrica à volta do mesmo, se aí existirem concentrações do antibacteriano iguais ou superiores à concentração inibitória mínima. Haverá inibição no disco, maior ou menor conforme a sensibilidade da estirpe bacteriana, também podendo interferir na dimensão do halo factores como propriedades físico-químicas do antibacteriano, velocidade e taxa de difusão, natureza do meio de cultura, composição do meio, espessura do meio, e pode-se verificar também que as bactérias de crescimento lento sejam mais susceptíveis porque o antibacteriano tem mais tempo para difundir.
Este método apenas permite uma informação qualitativa quanto à sensibilidade da estirpe bacteriana (sensível, intermédio ou resistente).
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